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抗卵巢抗體透明帶(Zona pellucida,ZP) 抗體檢測
更新時間:2011-03-10   點(diǎn)擊次數(shù):2977次

抗卵巢抗體透明帶(Zona pellucida,ZP) 抗體檢測


       透明帶(Zona pellucida,ZP)是圍繞在卵細(xì)胞周圍的一圈嗜酸性、明膠樣結(jié)構(gòu)。ZP有很強(qiáng)的免疫原性,能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生全身與局部的細(xì)胞與體液免疫,產(chǎn)生抗透明帶抗體(anti-zonapellucidaantibody,AZP)。AZP與女性不孕癥有關(guān)。檢測AZP的方法有免疫沉淀反應(yīng),間接免疫熒光法,間接血凝,膠乳凝集試驗(yàn),RIA及ELISA法等。無論何種檢測方法,均需透明帶抗原。由于豬和人卵透明帶有共同抗原,故可用豬卵透明帶抗原作試驗(yàn)。以下介紹間接ELISA法檢測AZP。

     1.試劑  ZP精制抗原:用注射器從新鮮豬卵巢中吸取卵泡液,在解剖鏡下從卵泡液中收集卵子,用PBS洗數(shù)次,放在含0.1%枸櫞酸鈉的0.05mol/LPBS(pH7.0)中,強(qiáng)力振蕩lmin,然后用PBS洗幾次。再將卵子加熱溶解后可獲得熱溶解抗原,即豬ZP的粗制抗原。經(jīng)SephadexG-100凝膠過濾組分后便可獲精制抗原??蛇x用高70cra,直徑1.2cra的層析柱。凝膠柱用0.01mol/L,pH7.4PBS流洗平衡后,加樣,再用PBS洗脫,分管收集。將*蛋白峰用30%聚乙二醇或變色硅膠濃縮,經(jīng)PBS透析24h后即為ZP精制抗原。

   2.操作步驟  每孔用0.1mLZP精制抗原(濃度用方陣法滴定)包被,置4~C過夜,用洗滌液洗3次,每次3min:每孔加含10%小牛血清的PBS 0.1mL,37~C封閉30rain,用洗滌液洗3次。加待測血清0.1mL,37℃!h后洗3次。加zui適濃度HRP-羊抗人IgC 0.1mL,37~C反應(yīng)1h,洗滌。加新鮮配制的底物溶液,每孔0.1mL,室溫作用20min后,各孔加2mol/LH2S040.1mL終止反應(yīng)。

     3.注意事項(xiàng)  如果用豬ZP做為抗原檢測人血清AZP,待測血清須用豬紅細(xì)胞吸收。如用人卵ZP作為抗原,待測血清須用AB型人紅細(xì)胞吸收。

    4.結(jié)果判定與臨床意義  與陽性、陰性對照血清參比,目測顯黃棕色者為AZP陽性, 無色或極淡黃色為陰性。也可測492nm的吸光度(A)值。若待測標(biāo)本A值大于或等于陰性對照血清A值的X+2.5S為陽性。

 

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