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抗菌血清的制備
更新時間:2015-11-27   點擊次數(shù):1636次

    抗體是機(jī)體接受抗原刺激后產(chǎn)生的一種具有免疫特異性的球蛋白。在免疫學(xué)實踐,為制備抗體常以抗原性物質(zhì)(細(xì)菌、病毒、類毒素、血清及其他蛋白質(zhì))給動物注射。經(jīng)過一定時間后,動物血清中可以產(chǎn)生大量的特異性抗體。這種含有特異性抗體的血清稱為免疫血清。免疫血清不但對傳染病的診斷、預(yù)防和治療有重要意義,而且對器官移植,腫瘤以及某些科研工作也有重要意義。

    抗體的產(chǎn)生通常與抗原的質(zhì)和量、動物種類以及接種途徑有密切關(guān)系。因此在制備免疫血清時要根據(jù)抗原的不同選擇適宜的動物種類和免疫方法。

抗菌血清的制備

1.抗原的制備:

    標(biāo)準(zhǔn)菌株的選擇:所用的菌種傷寒桿菌H901和傷寒桿菌O901應(yīng)具有典型形態(tài)菌落及生化反應(yīng)。在生理鹽水中不發(fā)生自身凝集,與特異血清有高度凝集者可作為菌種。

2.菌液的制備

Ⅰ.原液制備:

    H菌液的制備:將合格的傷寒桿菌H菌株接種于普通瓊脂的克氏瓶或大試管內(nèi)37℃孵育18—24小時。肉眼觀察有無雜菌生長,必要時作鏡檢。用無菌甲醛生理鹽水洗下菌苔,將洗下液體裝入無菌試管內(nèi),置37℃恒溫箱18—24小時以殺菌。得到原液。用作無菌試驗即將菌液接種于肉湯及瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)4天,無活菌生長者才可使用。

    O菌液的制備:將合格的傷寒桿菌H菌株依上法培養(yǎng)后,用無菌0.5%石灰酸鹽水將菌苔洗下,洗液裝入無菌試管置于37℃溫箱中18—24小時殺菌得原液。經(jīng)檢查無菌時可以使用(如無傷寒桿菌O菌株也可用H菌株制備O抗原。即用0.5%石灰酸生理鹽水洗下H菌菌液置100℃水浴60分鐘,破壞其H抗原即為O菌液。抗體

Ⅱ.應(yīng)用液的制備:

    合格的原液用標(biāo)準(zhǔn)比濁管計算含菌落數(shù)目后,用生理鹽水稀釋至每毫升含菌10億。是為了應(yīng)用液加入適量甲醛使其為0.25%,制備好的原液及應(yīng)用液均保存在2—10℃冰箱中備用,有效期為1年。

菌液濃度的計算及稀釋法:

菌液的濃度可用麥克法倫特氏標(biāo)準(zhǔn)比濁法來測定,方法如下:

(1)分別配制1%硫酸溶液及1%氯化鋇溶液

(2)取口徑相等質(zhì)地相同的試管10支,分別將硫酸及氯化鋇溶液加入,封固管口,注明號碼備用。

(3) 將洗下的細(xì)菌原液放入與比濁管相同的試管中并予以一定稀釋。與標(biāo)準(zhǔn)比濁管相比較,視其濁度相當(dāng)于比濁管的第幾管,然后將比濁管相當(dāng)菌數(shù)乘以稀釋倍數(shù)即可得到每毫升中所含細(xì)菌的數(shù)量。如細(xì)菌原液1:5稀釋后其濁度與第3管相當(dāng),則原液每毫升含菌數(shù)為9ⅹ5=45億。

(4)如原液5毫升,每毫升含菌45億今欲稀釋為每毫升含菌10億的溶液應(yīng)加生理鹽水的毫升數(shù):(5×45)/(10-5)=17.5毫升即細(xì)菌原液5毫升加生理鹽水17.5毫升稀釋即成。

3.免疫方法

(1)選擇體重2—3千克的健康雄兔2—3只,由耳靜脈采血1毫升,分離血清。與進(jìn)行免疫用的細(xì)菌做凝集試驗,測定有無天然凝集素。如無或微量時,該動物可用于免疫。

(2)將已稀釋的抗原按以下劑量及程序注入兔耳靜脈。

(3)次注射后7天耳靜脈采血1毫升,分離血清。用上述菌液作試管凝集試驗,滴定抗菌血清中抗體的效價,效價在1:2000以上可放血。若效價不高可再增量注射菌液1—2次,再行試血。試血合格可頸動脈放血(方法見附錄)。分離血清,加入防腐劑(如萬分之一的硫化汞)放4℃保存?zhèn)溆谩?br>


 

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